CHINESE熟女老太HD,成全视频在线观看免费高清版,国精品人妻无码一区二区三区蜜柚,精品人妻无码一区二区色欲产成人

銷售熱線

19126518388
  • 技術(shù)文章ARTICLE

    您當(dāng)前的位置:首頁 > 技術(shù)文章 > 原代細(xì)胞培養(yǎng)入門

    原代細(xì)胞培養(yǎng)入門

    發(fā)布時間: 2024-04-22  點擊次數(shù): 314次

    大家好!這篇文章是關(guān)于原代培養(yǎng)的入門知識,向剛?cè)腴T的同學(xué)科普這個實驗的基礎(chǔ)。


    包括以下內(nèi)容:

    1. 原代培養(yǎng)的概念和流程

    2. 分離組織的操作和注意事項

    3. 解離組織獲取細(xì)胞的三種常見方法


    原代培養(yǎng)是指細(xì)胞分離之后至第一次傳代之前的細(xì)胞培養(yǎng)階段,之后細(xì)胞就轉(zhuǎn)變成細(xì)胞系。


    原代培養(yǎng)可分為4個步驟:

    1. 獲取樣品

    2. 分離組織

    3. 解剖或解離組織

    4. 接種于培養(yǎng)皿中培養(yǎng)


    用于原代培養(yǎng)的樣品中可來源于2類,一是實驗室樣本,包括實驗動物的器官、組織,例如胚胎、腸道等;二是臨床樣本,例如通過手術(shù)過程分離出來的病人組織。

    分離組織

    分離組織的時候,要注意無菌操作,在無菌環(huán)境下切除組織,并將其至于PBS緩沖液或運輸專用的培養(yǎng)基中轉(zhuǎn)移至下一步操作的實驗室內(nèi)。
    另外,分離組織時有2個小技巧:
    1. 在取材時可以盡量多去除脂肪和壞死的組織。
    2. 使用鋒利的手術(shù)刀將組織切碎,以減小對組織的損傷

    獲取細(xì)胞

    獲取組織之后,我們要把細(xì)胞從組織中分離出來繼續(xù)生長,這個操作可分為兩種:

    1.將組織塊貼附于適宜的基質(zhì)中,細(xì)胞可從組織塊向外遷移生長,這個操作過程叫原代外植;


    2.將組織塊用機械法或酶消化法處理獲得細(xì)胞懸液,接種細(xì)胞懸液,其中部分細(xì)胞最終將黏附于基質(zhì)開始生長。

    原代細(xì)胞培養(yǎng)入門


    如果所取組織很小,則適于用原代外植法;如果組織較大,可用酶消化法以獲得更多的細(xì)胞。


    軟的組織適合于用機械法解離,一些硬的組織,如果產(chǎn)物的多少并不重要,或者從纖維間質(zhì)組


    織分離松散黏附的細(xì)胞,也可用機械法分離。

    下圖是不同處理方法的路線圖,同學(xué)們可以用于參考。
    原代細(xì)胞培養(yǎng)入門
    相對于原代外植,酶處理或機械法分離出細(xì)胞可以有效避免細(xì)胞因遷移率不同而選擇性生長的問題。
    同時,酶解法可以在比較短的時間內(nèi)培養(yǎng)出大量的細(xì)胞,因此,在實驗室中較常見,我們選擇這兩種方法來詳細(xì)講解。

    胰蛋白酶處理

    酶處理方法主要分為胰蛋白酶和膠原酶處理,而胰蛋白酶的反應(yīng)條件來劃分又可以分為冷胰蛋白酶和溫胰蛋白酶兩種。

    溫胰蛋白酶消化技術(shù)適于在相對短的時間消化大的組織,尤其對于整個小鼠胚胎或雞胚。
    由于成年組織含有大量纖維結(jié)締組織,故對成年組織效果不好,機械攪拌可損傷較敏感的細(xì)胞,如上皮細(xì)胞。
    用胰蛋白酶消化組織的缺點之一是于 37度條件下長期作用可損傷細(xì)胞,因此采用溫胰蛋白酶消化法,每隔30min收集一次細(xì)胞,而不是將組織一直浸泡在胰蛋白酶中(3~4h)等待其全部消化。
    與溫消化相比,冷消化可獲得較高的細(xì)胞存活率,培養(yǎng)24h 后生存率也提高。同時可保留更多的細(xì)胞種類。
    例如,經(jīng)冷消化處理的小鼠胚胎培養(yǎng)物含有更多的上皮細(xì)胞。冷消化也很方便,因為不用攪拌和離心,在4度條件下過夜即可。然而,這種方法受限于一次可處理的組織量。
    膠原酶處理
    如果組織含有大量纖維成分,又對胰蛋白酶非常敏感而不能使用胰蛋白酶消化的話。常用的是用膠原酶來消化處理。例如人的腫瘤組織、小鼠腎臟。
    使用膠原酶消化的過程比較慢但比較緩和,無需機械振蕩和特殊設(shè)備。對于大于1g 的組織,由于消化時間過長,費用也會非常高,因為需要大量的膠原酶。
    膠原酶可解離大多數(shù)結(jié)締組織,但存在成纖維細(xì)胞過度生長的問題,故需要再進行選擇性培養(yǎng)或進行細(xì)胞分離。
    機械法處理
    最后,就是機械法解離細(xì)胞。有幾種操作可以通過機械解離收集到細(xì)胞:
    • 切碎或“溢出",切割作用或被切表面的破損使細(xì)胞釋放出來
    • 篩網(wǎng)擠壓,用注射器芯將組織擠壓過篩網(wǎng)
    • 注射器吸打,將組織吸入注射器中,通過-個大孔徑的針頭或?qū)Ч軐⒁后w快速打出
    • 用吸管打碎,用大孔徑的吸管吸取組織塊上下吹打
    適用于機械解離的樣本僅僅是較軟的組織,如脾、胚肝、胚腦、成年腦或部分人和動物的軟質(zhì)腫瘤。
    對于腦,即使易于做到全部分解,然而與酶消化的結(jié)果相比,雖然花費的時間較少,但懸液中存活的細(xì)胞數(shù)也少。
    若組織取材不受限,細(xì)胞數(shù)量無關(guān)緊要,在短時間內(nèi)機械法可產(chǎn)生與酶消化同樣多的活細(xì)胞,但這種方法要消耗更多的組織,同時,死細(xì)胞可通過離心而去除。
    總結(jié)
    分離組織并進行原代培養(yǎng),是特殊功能細(xì)胞培養(yǎng)的第一個也是最重要的階段。
    若在這一階段細(xì)胞丟失了,則是不可補救的。因此,我有2個建議給大家:
    1 原代細(xì)胞存活率較低,因此接種密度可以比常規(guī)的細(xì)胞系要更高,營養(yǎng)條件也可以適當(dāng)提高,例如采用胎牛血清而不是小牛血清進行培養(yǎng)。

    2 不同種類的細(xì)胞應(yīng)采用相應(yīng)的解離方法,例如,胰蛋白酶比膠原酶作用強,建立單細(xì)胞懸液更高效;膠原酶不能解離上皮細(xì)胞,但這一特性成為它的一個優(yōu)點,可利用它使上皮細(xì)胞與間質(zhì)細(xì)胞分離并保持上皮細(xì)胞團的活力。機械法比酶消化法快,但對細(xì)胞損傷大。

    以上就是本期的內(nèi)容,更多資訊,歡迎點擊安培生物網(wǎng)站鏈接了解更多技術(shù)與產(chǎn)品資訊。

    安培生物致力成為推動生命科學(xué)進步值得信賴的合作者

    深圳/湛江安培生物科技有限公司,是一家具有核心的技術(shù)實力、先進的經(jīng)營管理水平和完善的市場銷售體系的生物高科技企業(yè)??偛吭O(shè)在廣東,服務(wù)面向全國。安培生物集進口試劑、實驗室耗材銷售、技術(shù)服務(wù)與合約開發(fā)為一體的專業(yè)化高科技公司,旨在為生命科學(xué)的發(fā)展提供較好的產(chǎn)品與服務(wù)。本公司建立了涵蓋分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)、信號傳導(dǎo)和神經(jīng)科學(xué)等領(lǐng)域的產(chǎn)品供應(yīng)線,在各個領(lǐng)域內(nèi)向用戶提供較高的水平和質(zhì)量穩(wěn)定的產(chǎn)品,安培生物致力于為廣大的科研機構(gòu)、高等院校等客戶提供各種產(chǎn)品、技術(shù)支持與服務(wù)。


    可以在第一時間為用戶提供比較先進的專業(yè)資訊和完備的產(chǎn)品和物流服務(wù)。 專業(yè)的技術(shù)力量使得我們能夠為廣大用戶提供強大的技術(shù)支持,深厚的人脈資源使得我們在全國主要城市擁有眾多的合作伙伴,安培生物非常榮幸能將世界上先進的高科技產(chǎn)品推薦給國內(nèi)從事生物學(xué)領(lǐng)域科研的老師和同仁。作為專業(yè)性的產(chǎn)品供應(yīng)商,公司出資存?zhèn)淞舜罅楷F(xiàn)貨,配合優(yōu)秀的銷售隊伍以及專業(yè)的技術(shù)支持,隨時為客戶提供服務(wù)。







產(chǎn)品中心 Products
久久精品嫩草影院| 亚洲曰本av在线天堂| 国产偷v国产偷v亚洲偷v| 日韩城人网站| 操操操日日日| 囯产极品美女高潮无套久久久| 国产成人精品免费直播| 国产片+人+综合+亚洲区| 小寡妇好紧进去了好大看视频一| 真实露脸国产乱子视频hd| 亚洲大成色www永久网| 视频国产精品丝袜第一页| 太大太长太粗太久太硬了| 亚洲精品伦理熟女国产一区二区| 国产精品亚洲ΑV天堂无码| 边吃奶边被躁欧美三级| 免费真实播放国产乱子伦| 大白屁股缝里浓黑的毛| 国产99久久精品一区二区| 亚洲第一第二第三第四第五第六| 两性午夜刺激爽爽视频| 99re在线这里只有精品免费| 免费真实播放国产乱子伦| 18禁白丝喷水视频WWW视频| 玩弄丰满熟妇XXXXX性| А√天堂资源官网在线资源| 来不及等待 来不及沉醉是什么歌| 国产在视频线精品视频2021| 性色AV乱码一区二区三区| 中文字幕ⅴ亚洲日本在线电影| 中文字幕一区二区在线观看| 免费真实播放国产乱子伦| 麻豆网站免费观看| 厨房一次又一次的索要| 综合欧美亚洲日本| 人妖在线精品一区二区三区| 日韩精品欧美国产精品亚| 少妇扒开粉嫩小泬视频| 天天在线天天看成人免费视频| 一级毛片一级毛片免费毛片| 在线亚洲不卡|