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    Nunc細(xì)胞工廠

    發(fā)布時(shí)間: 2023-01-11  點(diǎn)擊次數(shù): 964次

    原理

    用培養(yǎng)液制備細(xì)胞懸液,將懸液注入單元的各小室內(nèi)。使長(zhǎng)邊朝下,放置。將單元旋轉(zhuǎn) 90度,放平后用 CO2 充氣。然后封閉,進(jìn)行培養(yǎng)。

    材料與儀器

    單層細(xì)胞 0.25%天然胰蛋白酶 D-PBSA
    生長(zhǎng)培養(yǎng)液
    Nunc細(xì)胞工廠 硅酮管和連接器 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板或電子細(xì)胞計(jì)數(shù)器和計(jì)數(shù)用液體

    步驟

    1. 用胰蛋白酶消化后,將細(xì)胞懸浮,計(jì)數(shù)細(xì)胞,用 2 L 培養(yǎng)液將懸液稀釋至細(xì)胞密度為 2x104 個(gè)/ml。

    2. 使小室長(zhǎng)邊朝下,放置,將培養(yǎng)液供應(yīng)管與 Luer 連接管相接,再通過供應(yīng)管與底孔連通。

    3. 經(jīng)供應(yīng)管加入細(xì)胞和培養(yǎng)液。所有培養(yǎng)小室內(nèi)的液體將達(dá)到相同水平。

    4. 按單層細(xì)胞平面將小室轉(zhuǎn)動(dòng) 90度,使單元的短邊朝下,放置,使進(jìn)孔和供應(yīng)管朝上。

    5. 在 Luer 連接管處,中斷供應(yīng)管與培養(yǎng)液儲(chǔ)存器的連接。

    6. 與細(xì)胞單層平面垂直,將培養(yǎng)小室轉(zhuǎn)動(dòng) 90度,以底部放平,使培養(yǎng)面呈水平位。

    7. 用 5% CO2 空氣向單元充氣 5 min,然后夾住供應(yīng)管和出口。如果需要,可連續(xù)充氣。

    8. 倒掉供應(yīng)管和出口內(nèi)的培養(yǎng)液,然后將單元移入培養(yǎng)箱。

    9. 更換培養(yǎng)液(或收集培養(yǎng)液)時(shí),按步驟 6 的相反程序操作。除去輸入管上的濾器,然后按步驟 4 相反程序操作。

    10. 擦洗 Luer 連接管,松開夾具,使培養(yǎng)液流出。

    11. 按步驟 2~8 更換培養(yǎng)液。

    12. 收集細(xì)胞。

    (a)按步驟 9 和步驟 10 除去培養(yǎng)液。

    (b)加入 500 ml D-PBSA,然后除去。

    (c)加入 4℃的 500 ml 胰蛋白酶,30 s 后除去。

    (d)用剩余的胰蛋白酶將細(xì)胞消化 15 min。

    (e)加入培養(yǎng)液,搖動(dòng)培養(yǎng)小室,使細(xì)胞懸浮。

    (f)按步驟 9 和步驟 10 取出含細(xì)胞的培養(yǎng)液。

    13. 殘留細(xì)胞可用于接種下一批細(xì)胞,雖然這種方法難以控制接種密度。最好是將培養(yǎng)小室丟棄,用新的小室重新開始培養(yǎng)。


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